實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ儀的用途

實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ儀主要用于檢測特定基因在待測樣品中出現(xiàn)的次數(shù)，以高分辨率的變性梯度凝膠電泳ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ，對ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行測序的聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物分析方法。

實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ儀的使用方法

實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ儀的使用方法如下：

１．　開機(jī)預(yù)熱：儀器接通電源，屏幕顯示“Ｓｔａｒｔ”鍵，按“Ｅｎｔｅｒ”鍵開機(jī)，進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)。開機(jī)后儀器需預(yù)熱３０分鐘，期間“Ｓｔａｒｔ”鍵可直接開機(jī)，預(yù)熱完成后自動進(jìn)入主界面。

２．　操作主界面：開機(jī)后儀器進(jìn)入主界面，主界面顯示儀器的運(yùn)行狀態(tài)、時(shí)間、燈開關(guān)狀態(tài)、校準(zhǔn)序列和用戶登錄界面。用戶可通過點(diǎn)擊“主菜單”進(jìn)入ＰＣＲ儀的工作菜單。

３．　開蓋放光：在待機(jī)界面按“擴(kuò)展”鍵，選擇“放光”進(jìn)入放光模式。此時(shí)ＰＣＲ儀的光室會打開，同時(shí)背景燈光熄滅，儀器會自動去除光室內(nèi)的殘留熒光。

４．　校準(zhǔn)序列：在待機(jī)界面按“擴(kuò)展”鍵，選擇“校準(zhǔn)序列”進(jìn)入校準(zhǔn)序列模式。在ＰＣＲ儀工作前，必須進(jìn)行校準(zhǔn)序列。校準(zhǔn)序列是儀器根據(jù)ＰＣＲ反應(yīng)體系體積和反應(yīng)體系中熒光染料的濃度計(jì)算出的一個(gè)校準(zhǔn)系數(shù)。校準(zhǔn)序列可以由用戶自定義，用戶可以在“校準(zhǔn)序列模板”中選擇相應(yīng)的模板，也可以自定義新的模板。

５．　用戶登錄：在開機(jī)界面按“擴(kuò)展”鍵，選擇“用戶登錄”進(jìn)入用戶登錄模式。在ＰＣＲ儀開機(jī)狀態(tài)下進(jìn)行用戶登錄，登錄信息為開機(jī)密碼。

６．　手動ＰＣＲ：在主界面按“擴(kuò)展”鍵，選擇“ＰＣＲ”進(jìn)入ＰＣＲ模式。ＰＣＲ模式分為一步法和多步法。

７．　板次預(yù)設(shè)置：在ＰＣＲ儀工作菜單中點(diǎn)擊“板次預(yù)設(shè)置”，然后根據(jù)實(shí)際情況設(shè)置。用戶可對板次進(jìn)行設(shè)置和保存，保存的內(nèi)容只對本次儀器重啟后的使用有效。在保存板次時(shí)需輸入正確的開機(jī)密碼。

８．　用戶退出：在主界面按“取消”鍵，退出ＰＣＲ儀的操作模式。

實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ儀的注意事項(xiàng)

在使用實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ儀時(shí)，有幾個(gè)注意事項(xiàng)：

１．　實(shí)驗(yàn)操作人員必須熟悉所用ＰＣＲ儀的基本原理、性能狀態(tài)以及操作步驟等，并嚴(yán)格按照說明書操作。

２．　在ＰＣＲ儀開啟之前，要確保所有反應(yīng)體系都已置于ＰＣＲ儀腔體內(nèi)，并關(guān)閉ＰＣＲ儀門。

３．　開始ＰＣＲ反應(yīng)之前，應(yīng)設(shè)置好ＰＣＲ儀的相關(guān)參數(shù)，如循環(huán)參數(shù)、溫度等。

４．　在ＰＣＲ反應(yīng)運(yùn)行過程中，應(yīng)避免非特異性擴(kuò)增，因此需要設(shè)計(jì)特異性引物。

５．　熒光定量ＰＣＲ的實(shí)驗(yàn)結(jié)果易受不同儀器、不同試劑和不同操作者的影響，因此應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)化體系，以獲得更好的實(shí)驗(yàn)效果。

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